Санитарно-протозоологические исследования

При помощи санитарно-протозоологических методов исследования обнаруживают кишечных цист простейших во внешней среде, определяют их видовой, количественный состав и жизнеспособность.

Исследование почвы, на цисты кишечных простейших. Пробы почвы берут прежде всего с тех участков, где наиболее часто может наблюдаться фекальное загрязнение. Одновременно с отбором проб описывается обследуемая территория, способы водоснабжения и удаления нечистот, расстояние обследуемых объектов от возможных источников загрязнения, особенности климатических условий в период проведения исследований, а также характер растительного покрова почвы. Пробы отбираются с поверхности почвы и на глубине до 10 см. В более глубоких слоях почвы цисты не обнаруживаются (И. К. Падченко с соавт., 1981). Отобранную почву помещают в стеклянные банки с крышкой. В каждой пробе должно содержаться не менее 300 г материала. Чтобы предупредить возможную гибель цист, к отобранным пробам добавляют 0,85% водный раствор натрия хлорида. Анализ проб производят в течение 2 дней после их отбора. До исследования их хранят в бытовом холодильнике при температуре +2°...+6°С.
Для обнаружения цист в почве нами предложены две модификации исследования (И. К. Падченко с соавт., 1981, 1982).
Пробу почвы помещают в большую фаянсовую ступку, постепенно добавляют к ней водопроводную воду, тщательно растирают пестиком до гомогенной кашицы и выливают ее в цилиндр емкостью 1—2 л, предварительно наполненный на 2/3 объема водопроводной водой. Полученную смесь отстаивают в течение 15 мин. Образовавшуюся на поверхности смеси пленку удаляют петлей. После 15-минутного отстаивания жидкую часть смесц отсасывают сифоном в чистый цилиндр, а осадок повторно отмывают (не менее 3 раз) водопроводной водой и смешивают с жидкой частью смеси, полученной после первого 15-минутного отстаивания. Собранная в один цилиндр жидкая часть смеси отстаивается в течение 24 ч, после чего надосадочная жидкость удаляется сифоном, а осадок исследуется в нативных мазках и окрашенных раствором Люголя препаратах. С этой целью осадок тщательно встряхивают и 1 каплю полученной взвеси наносят пастеровской пипеткой на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым микроскопом. Целесообразно исследовать не менее 1 мл осадка с последующим пересчетом на общий его объем. При незначительной загрязненности почвы цистами исследуют весь осадок. Анализ осадка должен производиться в течение первых 2—3 дней после его получения.
Чтобы осадок длительное время оставался пригодным для исследования, к нему необходимо добавить одну из консервирующих жидкостей (Сафаралиева, Барроу и др.) в соотношении 1:2. В этом случае морфологические признаки цист сохраняются в течение 1 и более месяцев. Флаконы с указанной смесью хранят в бытовом холодильнике при температуре +2°... + 6°С. Осадок, образовавшийся на дне флакона, наносят на предметное стекло пастеровской пипеткой или деревянной палочкой, накрывают покровным стеклом и просматривают под средним увеличением микроскопа.
При использовании консерванта санитарно-протозоологические исследования можно проводить в полевых условиях, а также при организации экспедиций в отдаленные населенные пункты, районы или области республики.
Пробу почвы помещают в большую фаянсовую ступку, постепенно добавляют к ней водопроводную воду, тщательно растирают пестиком до образования гомогенной кашицы. Затем ее выливают в стеклянный цилиндр емкостью 10 л (высотой —70 см, диаметром —в пределах 14 — 16 см), предварительно наполненный на 3/4 объема водопроводной водой. Полученную смесь отстаивают в течение 15 мин. Образовавшуюся на поверхности смеси пленку удаляют петлей. После 15-минутного отстаивания надосадочную жидкость отсасывают сифоном в чистый цилиндр емкостью 10 л и отстаивают в течение 24 ч. После этого удаляют сифоном надосадочную жидкость, а осадок повторно смывают Чистой водопроводной водой в цилиндр емкостью 1 л, предварительно наполненный на 3/4 объема водопроводной водой. Полученную смесь отстаивают в течение 24 ч, после чего надосадочную жидкость удаляют сифоном, а осадок исследуют в нативных мазках и окрашенных раствором Люголя препаратах по той же методике, что и в первом случае.

Исследование воды на цисты кишечных простейших. Отбор проб производят из рек, озер, прудов, арыков, бассейнов, водохранилищ и др. Показанием для отбора проб воды является повышенная заболеваемость населения кишечными инфекциями в районе расположения соответствующих водоемов или водоисточников, а также высокий процент у обследованных возбудителей кишечных протозойных инвазий.

Для оценки эффективности очистки сточной жидкости от цист па очистных сооружениях и выяснения санитарно-протозоологической и эпидемиологической ситуации по протозойным инвазиям кишок в районе их расположения анализу целесообразно подвергать также пробы сточной воды Отбор проб осуществляют на различных этапах очистки сточной воды, до поступления на очистные сооружения, после механической очистки, из отстойной части очистных сооружений и по завершению процесса искусственной биологической ее Очистки. В сопроводительной документации на отобранные пробы воды указывается следующее: наименование водоема или водоисточника,. место его расположения, погодные условия в период отбора проб, время и место отбора пробы. Количество воды, отбираемой на 1 пробу, может колебаться в зависимости от предполагаемой степени ее загрязнения цистами в следующих пределах: вода из колодцев и водопроводной сети — 1.5—20 л, из открытых водоемов—10—15 л, сточная вода после завершения процесса ее очистки— 10—15 л, сточная вода на разных этапах ее очистки на очистных сооружениях—10—12 л. Из открытых водоемов отбирают пробы выше и ниже мест возможного загрязнения ее различными нечистотами, в том числе и бытовыми сточными водами. При взятии из колодцев воды общественным ведром его трехкратно ополаскивают водой из того же колодца. Водопроводную сеть промывают путем 5—10-минутного пропуска воды через кран.
Сточную воду отбирают по 500—600 мл ежечасно в течение суток или по 1 л ежечасно на протяжении светового дня (с 7 ч до 20 ч) и сливают ее в один сосуд.
Отобранные для анализа пробы воды из различных водоемов и водоисточников наливают в высокие цилиндры емкостью не менее 10 л, подвергают осветлению путем прибавления одного из коагулянтов,'(Сернокислый алюминий, сернокислое железо и др.) в количестве 0,3 г/л, тщательно перемешивают и отстаивают 2 ч. Затем удаляют сифоном жидкую часть, а осадок с небольшим количеством надосадочной жидкости повторно смывают водопроводной водой в цилиндр емкостью 1 л, постепенно добавляют к нему 1 % водный раствор соляной кислоты до растворения хлопьев коагулянта. Полученную смесь разбавляют в цилиндре водопроводной водой, доводят ее общий объем до 1 л и отстаивают 24 ч. После этого жидкую часть удаляют сифоном, а осадок подвергают микроскопическому исследованию в нативных мазках и окрашенных раствором Люголя препаратах. Для длительного хранения осадка к нему добавляют консерванты в соотншенни 2:1.

Пробы сточной воды, взятые на разных этапах биологической очистки, наливают в высокие цилиндры емкостью не менее 10 л, отстаивают в течение 15 мин. Всплывшие на поверхности в сосуде плотные примеси удаляют петлей. После 15-минутного отстаивания жидкую часть сточной воды переливают сифоном в другой цилиндр емкостью 10 л и отстаивают 24 ч, а осадок удаляют. Через 24 ч надосадочную жидкость удаляют сифоном, а осадок с небольшим количеством надосадочной жидкости повторно смывают водопроводной водой в цилиндр емкостью 1 л и отстаивают 24 ч. После этого жидкую часть удаляют сифоном, а осадок подвергают микроскопическому исследованию. Длительное хранение осадка в лабораторных условиях обеспечивают при помощи консервантов.

Исследование осадка сточных вод. Пробы осадка в количестве 1 л (при плотной его консистенции — 1 кг), отобранные на очистных сооружениях, тщательно растирают пестиком в большой фаянсовой ступке, постепенно добавляя к нему водопроводную воду. Полученную взвесь выливают в цилиндр емкостью 10 л, заполненный на 3/4 объема водопроводной водой, и отстаивают 15 мин. Через 15 мин надосадочную жидкость переливают сифоном в большой цилиндр, а осадок удаляют. Затем жидкую часть осадка смешивают в большом цилиндре с коагулянтом и исследуют в дальнейшем как воду из различных водоемов и водоисточников.

Исследование смывов с поверхности различных объектов внешней среды. Смывы с поверхности предметов обихода, бытовой или производственной обстановки (игрушки, детские горшки, дверные ручки, посуда и др.), а также с рук обслуживающего персонала, детей и других лиц, подозреваемых на наличие у них кишечных протозойных инвазий, производят 0,85% водным раствором натрия хлорида _с помощью ватного тампона или щеточки. Пробу выливают в высокий цилиндр емкостью 0,5-— 1 л с водопррводной водой, которая наливается с таким расчетом, чтобы при добавлении смыва не превысить общую емкость цилиндра. Всплывшие на поверхность жидкости кусочки бумаги, ткани и другие крупные частицы удаляются петлей с сеткой, а оставшаяся жидкость отстаивается в течение 18—24 ч. После этого жидкая часть смыва удаляется сифоном, а осадок промывается путем встряхивания и центрифугирования при 2500 об/мин в течение 3 мин и исследуется в нативных мазках и окрашенных раствором Люголя препаратах под световым микроскопом. Причем в каждом случае необходимо исследовать не менее 1 мл осадка. В случае отсутствия в смыве грубых примесей полученную взвесь отстаивают в течение 18—24 ч в высоком цилиндре (емкостью 0,25—0,5 л) без предварительного добавления в него водопроводной воды. После этого надосадочная жидкость удаляется сифоном, а осадок исследуется в нативных и окрашенных препаратах.

Определение жизнеспособности цист в различных условиях внешней среды необходимо при изучении санитарно-протозоологической и эпидемиологической ситуации и оценке эффективности проводимых профилактических мероприятий в очагах указанных инвазий.
Для определения жизнеспособности цист каплю изучаемой взвеси (осадок смыва с поверхности различных объектов внешней среды, почвы или воды) наносят на предметное стекло, добавляют каплю 0,1% водного раствора эозина (лучше каплю водного раствора акридинового оранжевого в разведении 1:500, 1:1000; И. К. Падченко с соавт., 1982), тщательно перемешивают и. накрывают покровным стеклом. Препараты изучают под средним увеличением светового микроскопа. При этом жизнеспособные цисты кишечных простейших остаются неокрашенными, а мертвые — приобретают розовую (окрашенные эозином) или желтую (окрашенные акридиновым оранжевым) окраску.

Препараты, окрашенные водным раствором акридинового оранжевого, можно исследовать также под люминесцентным микроскопом. В этом случае у жизнеспособных цист наблюдается лишь слегка окрашенная в оранжевый цвет оболочка, а цитоплазма имеет несколько темноватый оттенок. Цитоплазма и оболочка у погибших цист окрашиваются в красный цвет.
При исследовании учитывают не только жизнеспособные, но и погибшие цисты с целью определения показателя, характеризующего соотношение между ними. Наличие этого показателя способствует выяснению вопроса о возможном участии того или иного объекта внешней среды в передаче соответствующей инфекции.

В заключении о результатах санитарно-протозоологических исследований указывают общее количество проб, число проб, загрязненных цистами, видовой состав обнаруженных цист и их количество, а также соотношение между живыми и погибшими возбудителями в относительных и абсолютных числах. Заключение об отсутствии обсемененности цистами объектов внешней среды, почвы или воды дается лишь в том случае, если в пробах нет цист какого-либо вида кишечных простейших. При обнаружении любого числа цист указывается, что обследованные объекты внешней среды загрязнены соответствующим видом кишечных простейших.