Диагностика протозойных болезней

Малярия. Диагноз малярии устанавливается на основании клинико-лабораторных исследований и эпидемиологического анамнеза. При этом выясняются вопросы о пребывании больного в эндемичных по малярии зонах, путях следования, а также клинических формах проявления болезни. Окончательно диагноз считается установленным при обнаружении в крови плазмодиев. Следует при этом учитывать, что в первые дни лихорадки количество паразитов в крови незначительное и только после 2—3 приступов паразитемия становится достаточно выраженной. При отсутствии в крови паразитов после 3 и более приступов лихорадки диагноз ставится под сомнение. Особенно тщательно должны проводиться лабораторные исследования при четырехдневной малярии, так как в этом случае в периферической крови циркулирует обычно небольшое количество паразитов.

Лабораторному исследованию подвергают мазки и толстые капли крови. Исследования должны быть повторными. Мазки и толстые капли готовят на чистых обезжиренных предметных стеклах. Мазок делают из капли крови, нанесенной на предметное стекло, шлифованными предметными стеклами со срезанными углами. Он должен быть ровным, тонким и не доходить до краев стекла. Для приготовления толстой капли наносят 1—2 капли крови на предметное стекло и растирают ее углом другого предметного стекла до размеров двухкопеечной монеты. Можно нанести 1—2 капли крови на свежий, еще не высохший толстый мазок. В этом случае образуется толстая капля в виде правильного диска, в которой форменные элементы крови и плазмодии не деформированы. При исследовании толстой капли повышается возможность обнаружения плазмодиев, так как в ней содержится в 30—40 раз большее количество исследуемой крови, чем в мазке. Толстые капли окрашивают нефиксированными, а мазки фиксируют в смеси Никифорова (20 мин), метиловом (3 мин) или этиловом (10—15 мин) спирте. Мазки и толстые капли окрашивают в течение 40—45 мин краской Романовского. Для приготовления рабочего раствора 1 каплю этой краски разводят в 1 мл нейтральной (pH 7,0) или слабощелочной воды. Промытые водой и высушенные препараты исследуют под большим увеличением светового микроскопа (иммерсия). При этом определяется видовой состав плазмодиев и стадия их развития.

Из иммунологических методов диагностики малярии чувствительны и специфичны реакция флюоресцирующих антител (РФА) и PH ГА. Однако из-за трудности получения антигенов эти реакции доступны только для крупных лабораторий (3. И. Глазунова, Ю. П. Горбунова, 1981).

 

 

Протозойные кишечные болезни. Диагноз (амебиаз, балантидиаз, лямблиоз и др.) устанавливается при обнаружении в исследуемом материале (фекалии, дуоденальное содержимое, слиз£, материал, полученный при эндоскопических исследованиях, содержимое абсцессов и т. д.) возбудителя соответствующей инвазии. Необходимым условием при этом является, кроме того, наличие клинических признаков, характерных для той или иной протозойной болезни, а также отсутствие у больного заболевания другой этиологии (бактериальной, вирусной и другой природы). Чаще всего на анализ берут фекалии, в которых могут находиться вегетативные или цистные формы простейших кишок. При исследовании плотного и оформленного кала, содержащего простейших в стадии цисты, свежесть материала не имеет существенного значения, при исследовании жидких фекалий, содержащих простейших в вегетативной стадии, требуется свежесть материала, а также физическая чистота и сухость посуды. Эти требования объясняются тем, что энта- мебы в вегетативной стадии быстро дегенерируют вне человеческого организма. Такой материал исследуется в течение
1-го   часа. На каждого больного просматривают 2 нативных мазка и 2 препарата, окрашенных раствором Люголя.

 

 

Методика исследования нативных и окрашенных раствором Люголя препаратов.Частица оформленного кала разбавляется на предметном стекле каплей 0,85% раствора натрия хлорида, покрывается покровным стеклом и просматривается вначале при малом, а затем при среднем увеличении светового микроскопа. Жидкий кал изотоническим раствором NaCI не разводят. При наличии в кале комочков слизи или прожилок крови необходимо начинать исследование именно с них.

Методика приготовления и просмотра препаратов, окрашенных раствором Люголя, та же, что и нативных мазков. Готовят нативные и окрашенные раствором Люголя препараты на одном предметном стекле. Вначале просматривают нативный мазок, так как за этот период цисты успевают прокраситься раствором Люголя.

 

Методика применения консервантов. При использовании консервантов морфологические признаки вегетативных форм и цист сохраняются длительное время (более 1 мес), Можно использовать следующие консерванты: Барроу — фенол кристаллический — 20 г, формалин концентрированный— 50 мл, спирт этиловый 96% — 125 мл, изотонический раствор NaCI — до 1000 мл. Сафаралиева — сернокислый цинк — 16,5 г, формалин концентрированный —100 мл, фенол кристаллический— 25 г, уксусная кислота концентрнрованная — 50 мл, метиленовый синий — 1—2 г, вода дистиллированная — до 1000 мл.

Консервант разливают в пенициллиновые флакончики примерно по 2—3    мл. С помощью резинки к флакончику фиксируется деревянная палочка (длиной не более 4 см). Этой палочкой фекалии забираются после естественной дефекации и вносятся во флакончик с консервантом. Флакончик закрывают резиновой пробкой и энергично встряхивают. Флаконы с материалом можно хранить при комнатной температуре. Материал, заключенный в консервант, перед исследованием не встряхивают. Каплю осадка пипеткой переносят на предметное стекло. При исследовании материала, помещенного в консервант Барроу, для доокрашивания добавляют каплю одного из красителей (0,01 % раствор тионина, азур А или метиленового синего) и тщательно перемешивают. При использовании консерванта Сафаралиева доокраска не требуется. Нанесенный на предметное стекло исследуемый материал покрывают покровным стеклом и просматривают сначала при малом, а затем при среднем увеличении микроскопа.

 

Методы концентрации цист. Метод формалинэф ирного обогащения. Реактивы: раствор формалина (формалин концентрированный — 10 мл; натрия хлорид —0,85 г, вода дистиллированная — до 100 мл), эфир серный, раствор Люголя. Ход исследования: в центрифужную рробирку наливают 5—6 мл раствора формалина, вносят частицу фекалий величиной с горошину, тщательно размешивают, добавляют 2 мл эфира, закрывают пробирку пробкой, энергично встряхивают 1 мин и центрифугируют пробирку 1 мин при 2500 об/мин или 3 мин при 1500 об/мин. После центрифугирования в пробирке видны три слоя: формалин, фекальная пробка и эфир. Цисты скапливаются на самом дне пробирки. Деревянной палочкой или петлей осторожно отделяют фекальную пробку от стенок пробирки, а пробирку быстро переворачивают вверх дном. Затем пробирку ставят в штатив, пипеткой набирают каплю осадка и наносят на предметное стекло, добавляют каплю раствора Люголя, размешивают, накрывают покровным стеклом и микроскопируют.

 

Метод механического осаждения. Кусочек кала величиной с орех тщательно растирают в ступке с небольшим количеством воды. Полученную эмульсию выливают в высокий цилиндр с водопроводной водой (500—1000 мл), в котором она стоит в течение 15 мин. Образовавшаяся поверхностная пленка удаляется петлей с сеткой. Через 15          мин вся масса жидкости отсасывается сифоном, за исключением самой нижней части высотой 2—3 см и осевшей на дно массы, которая выбрасывается. Жидкость, которую отсосали в другой высокий цилиндр, отстаивают до следующего дня (для осаждения цист на дно цилиндра), после чего она удаляется сифоном, а осадок, содержащий цисты, промывается путем встряхивания и центрифугирования. Полученный осадок исследуют в нативных и окрашенных препаратах.

 

Диагностика мочеполового трихомоноза. Окончательный диагноз при этой инвазии устанавливают при выявлении трихомонад. Материалом для исследования служат выделения из влагалища, моча, эякулят, секрет предстательной железы, соскоб со слизистой оболочки мочеполовых путей, резецированные органы и ткани и др. Наиболее простым и доступным методом обнаружения трихомонад является микроскопическое исследование нативных препаратов. Исследуемый материал наносят на предметное стекло длинной пипеткой и микроскопируют вначале под малым, а затем под средним увеличением (обычно в условиях женской консультации или кожно-венерологического диспансера). При отсутствии такой возможности материал вносят в пробирку, •содержащую 0,5—1 мл 0,85% водного раствора натрия хлорида и исследуют в первые сутки после его получения. Пробирки с материалом хранят в лабораторных условиях при температуре +20°... + 37°С. Трихомонады легко определяются по присущей им форме и характеру движения.

 

Для диагностики мочеполового трихомоноза используются также методы микроскопического исследования окрашенных препаратов и культивирования. Чаще всего препараты окрашивают по Романовскому. Техника приготовления и исследования окрашенных препаратов такая же, как и при малярии. Можно окрашивать препараты по Граму» 0,5—1,0% водным раствором метиленового синего, 0,1% раствором генцианвиолета и другими красителями (Н. С. Бакшеев, И. К. Падченко, 1971). Серологические методы исследования имеют при мочеполовом трихомонозе вспомогательное значение.

 

Все права защищены. Копирование материалов возможно только с разрешения администрации сайта.