Диагностика гельминтозов

Макроскопические методы основаны на обнаружении невооруженным глазом или при небольшом увеличении непосредственно целого паразита либо его фрагментов (членики, сколексы). Для выявления крупных объектов проводят общий осмотр фекалий, после чего разводят их водой» равномерно размешивают и небольшими порциями при хорошей освещенности просматривают в чашках Петри на темном фоне, извлекая пинцетом подозрительные частицы, которые затем помещают между двумя предметными стеклами и просматривают под лупой или под малым увеличением микроскопа. Более эффективен способ промывки, состоящий в разведении фекалий водой 1:10 с последующим отстаиванием и повторением такой процедуры несколько раз, пока надосадочный слой воды не станет прозрачным. После этого надосадочную жидкость сливают, а осадок фракционно переносят в чашки Петри и просматривают на темном фоне. Видовая принадлежность выделенных гельминтов определяется по морфологическим признакам. Цестоды диагностируют по сколексам и зрелым членикам. Макроскопические методы чаще всего применяются для суждения о качестве проведенной дегельминтизации.
Микроскопические методы используются для обнаружения яиц и личинок гельминтов (ово- и лярвоскопия).

Эффективным и удобным методом гельминтологического исследования является изучение толстого мазка по Като, сущность которого состоит в обнаружении яиц гельминтов в толстом мазке фекалий, просветленных глицерином и подкрашенных малахитовой зеленью. Состав смеси Като — 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина, 500 мл 6% раствора фенола. Раствор стабилен, может храниться при комнатной температуре. Для приготовления препаратов кусочки фекалий величиной с горошину наносят на предметное стекло, покрывают пленкой гидрофильного целлофана, выдержанного в смеси Като в течение 24 ч, и придавливают его к стеклу для равномерного распределения материала. Просветленные в течение 40—60 мин мазки микроскопируют. Подсчитывают обнаруженные яйца гельминтов и по морфологическим признакам определяют их видовую принадлежность. Метод позволяет выявить яйца аскарид, власоглава, цестод, трематод, в меньшей степени — анкилостомид и карликового цепня.

Широко применяются также методы обогащения. Принцип флотационных методов состоит в суспендировании фекалий в солевом растворе, имеющем большую относительную плотность по сравнению с яйцами гельминтов, вследствие чего они всплывают на поверхность. Под микроскопом исследуется содержимое поверхностной пленки. В качестве обогатительных смесей используют растворы: поваренную соль — 400 г в 1 л воды (относительная плотность по Фюллеборну —1,18); азотнокислый натрий — 1 кг в 1 л воды (относительная плотность по 'Калантарян—1,38); азотнокислый натрий — 900 г и азотнокислый калий — 400 г в 1 л воды (относительная плотность по Брудастову и Красноносу—1,48). Приготовленные растворы кипятят и охлаждают.
Для исследования вносят 5—10 г фекалий в стеклянный или фаянсовый стакан, добавляют в него 100—200 мл солевого раствора и тщательно размешивают. Затем удаляют всплывшие крупные частицы деревянным шпателем или совочком из бумаги либо картона и тотчас же прикладывают к поверхностной пленке широкое предметное стекло так, чтобы солевой раствор и предметное стекло полностью соприкасались. После 30—40-минутного отстаивания смеси предметное стекло снимают, кладут под микроскоп пленкой кверху и тщательно просматривают всю поверхность. Во избежание высыхания можно добавить 2—3 капли 50% раствора глицерина. Поверхностную пленку можно снимать также проволочной петлей. Эффективность флотационных методов повышается по мере увеличения относительной плотности солевых растворов. С помощью этих методов можно выявлять яйца нематод, цестод и трематод.

Для обнаружения яиц в фекалиях применяют метод седиментации по Красильникову. Фекалии смешивают с 1 % раствором детергента (стиральный порошок «Лотос» и др.) в соотношении 1:10 до образования суспензии. Под влиянием детергента растворяются различные компоненты фекалий (белки, жиры, тканевые элементы). Через 30 мин содержимое пробирки встряхивают в течение 1—2 мин, после чего центрифугируют 5 мин. Из осадка готовят препараты и просматривают под микроскопом.
В полевых условиях, а также при массовых обследованиях населения на пораженность гельминтами удобно применять метод толстого мазка по Като. В стационарных условиях при обследовании больных предпочтительнее использовать наиболее эффективные флотационные методы. При использовании этих методов в ходе микроскопии целесообразно подсчитывать обнаруженные в препарате яйца. При соблюдении стандартности навески или объема, взятых для исследования фекалий (например, 1 чайная или столовая ложка), и постоянного единого объема солевых растворов можно ориентировочно судить об интенсивности инвазий. Этот количественный учет может быть полезным при обосновании назначенного лечения и оценке эффективности проведенной дегельминтизации. Кроме того, для установления интенсивности инфекции могут быть использованы и другие более точные количественные методы, в частности метод Столла.

Для диагностики тениаринхоза и энтеробиоза применяют метод исследования перианально-ректальных соскобов. Деревянным шпателем, смоченным в 50% растворе глицерина, делают соскоб с перианальных складок утром до дефекации в окружности заднего прохода и нижних отделов прямой кишки. Полученный материал, очищенный со шпателя краем покровного стекла, помещают на предметное стекло в каплю 50% раствора глицерина, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Можно исследовать также полоску целлюлозной ленты, которую вначале прижимают клейкой стороной к пернанальным складкам, затем помещают на предметное стекло и микроскопируют.

Обнаружение личинок нематод в фекалиях по методу Бермана. Метод основан на термотропном свойстве личинок. Для исследования берут 1 столовую ложку фекалий, помещают их в металлическую сетку или сетку из нескольких слоев марли на проволочном каркасе. Сетку устанавливают в воронку, укрепленную в штативе. К воронке присоединяется резиновая трубка с зажимом. Приподняв сетку, воронку заполняют водой (температура +40°...+50°С) так, чтобы нижняя часть сетки была погружена в воду. Личинки из фекалий активно мигрируют в теплую воду и, оседая, скапливаются в нижней части воронки. Через 2—4 ч зажим открывают, воду спускают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 2—3 мин. Затем сливают надосадочную жидкость, осадок переносят на предметное стекло и просматривают под микроскопом, где отыскивают подвижные личинки возбудителя стронгилоидоза.

Метод Харада и Мори позволяет дифференцировать личинки анкилостом и некаторов. Личинки анкилостомид культивируют на фильтровальной бумаге. С этой целью 0,5 г свежих фекалий, взятых у больного не позже чем через 1 ч после дефекации, наносят на полоски фильтровальной бумаги, размером 12X1,5 см, оставляя оба конца полоски чистыми. Один конец полоски погружают в пробирку, четвертая часть которой заполнена водой, а другой — зажимают пробкой. Пробирки ставят в термостат при температуре +26... + 28°С. Развившиеся из яиц личинки опускаются по фильтровальной бумаге и оседают на дно пробирки. Спустя 5—6 дней полоску бумаги удаляют, а оставшуюся в пробирке жидкость исследуют под лупой либо центрифугируют. Образовавшийся при центрифугировании осадок исследуют под световым микроскопом. При использовании вместо пробирок четырехгранных стеклянных банок (размером 15ХЮХ7 см), к стенкам которых прикрепляют по 4 бумажные полоски, эффективность анализов повышается (Г. М. Ма- руашвили с соавт., 1966).

Методы исследования на шистосомозы. Исследование фекалий — порцию фекалий смешивают с 250 мл воды, процеживают через 3 слоя марли в конический сосуд, который доверху наполняют водой. Через 30 мин слой жидкости сливают, к осадку приливают свежую порцию воды. Осадок промывают до получения прозрачной надосадочной жидкости и микроскопируют.

Метод лярвоскопии — в колбу Эрленмейера с напаянной сбоку стеклянной трубочкой, направленной вверх, помещают 20—25 г фекалий и промывают водопроводной водой. Затем колбу накрывают темной бумагой, оставив на свету напаянную стеклянную трубочку при температуре +25...+30°С. Вылупившиеся мирацидии концентрируются у мениска в боковой трубочке, где их можно видеть с помощью лупы или невооруженным глазом. Исследование мочи —100 мл мочи, собранной в период между 10 ч утра и 14 ч дня, или суточную порцию отстаивают, а затем центрифугируют при 1500 об/мин. Полученный осадок наносят* на предметное стекло и микроскопируют. ВОЗ рекомендует метод фильтрования всей порции мочи. После фильтрования фильтры обрабатывают формалином или подогревают (чтобы убить яйца), а затем увлажняют водным раствором нингидрина. В подсушенных препаратах зародыши яиц приобретают фиолетовую окраску.

Применение иммунологических методов исследования для диагностики шистосомозов связано с трудностями, так как взрослые шистосомы и их яйца содержат большое количество антигенов, вызывающих иммунные реакции, которые не являются видоспецифическими (Д. Бредли, 1979).

Для лабораторной диагностики описторхоза наряду с методами Като и Калантарян можно применять метод Горячева, который основан на принципе осаждения. В высокий цилиндр наливают примерно 100 мл насыщенного раствора натрия хлорида или 22% раствора нитрата калия. Затем 0,5 г фекалий размешивают в 20 мл воды в ступке или другой посуде. Полученную взвесь осторожно наслаивают через воронку с двумя слоями марли на солевой раствор. Через 3 ч поверхностный слой смеси в цилиндре удаляют пипеткой, а остальную часть отстаивают в течение 12—24 ч, после чего центрифугируют. Образовавшийся осадок исследуют под микроскопом. Метод пригоден для Обнаружения яиц метагонимуса и клонорхиса.
Обнаружение яиц и личинок гельминтов в дуоденальном содержимом, мокроте и крови. Из полученных порций дуоденального содержимого и желчи выбирают пинцетом хлопья и просматривают под микроскопом. Затем содержимое смешивают с равным количеством эфира, взбалтывают и центрифугируют. Осадок переносят на предметное стекло и просматривают под микроскопом. С помощью этого метода можно выявить личинки возбудителя стронгилоидоза, а также яйца 'возбудителей описторхоза, фасциолеза, анкилостомидозов, клонорхоза и других гельминтозов, паразитирующих в печени, желчных путях и двенадцатиперстной кишке.
Мокроту вначале просматривают под лупой, выбирают подозрительные частицы и определяют их принадлежность. Затем готовят на предметных стеклах нативные мазки и микроскопируют. В мокроте могут быть обнаружены яйца шистосом, парагонимуса, мигрирующие личинки аскарид и возбудителя стронгилоидоза, а также элементы личиночной стадии эхинококка.
При исследовании крови готовят тонкие мазки или толстую каплю и окрашивают их по Романовскому. В крови могут быть выявлены микрофилярии мигрирующих нематод.

Иммунологические методы диагностики гельминтозов могут применяться в том случае, если прямые методы паразитологического анализа (обнаружение целых паразитов, их фрагментов, члеников, сколексов, яиц или личинок) в силу тех или иных причин оказываются невозможными. Это может отмечаться при паразитировании в органах и тканях личиночных стадий развития гельминта (эхинококкоз, альвеококкоз, трихинеллез, цистицеркоз) в фазе миграции личинок в организме хозяина (мигроаскаридоз, токсокароз, шистосомоз, начальные стадии стронгилоидоза и др.), при паразитировании только самцов, неинтенсивной инвазии, а также при угасшей или еще не начавшейся репродуктивной функции паразита. В этих случаях иммунологические методы, основанные на выявлении специфической сенсибилизации организма при помощи кожных аллергических реакций или обнаружении специфических антител, продуцируемых в ответ на антигенное раздражение паразита и выявляемых при помощи различных серологических реакций, могут использоваться для постановки диагноза, а также при проведении эпидемиологических исследований среди населения. По данным Е. С. Лейкиной (1980), иммуноэпидемиологическое обследование людей, проведенное в ряде стран, позволило выявить эндемичные и высокоэндемичные территории по целому ряду гельминтозов (в Румынии — по эхинококкозу н трихинеллезу, в Пуэрто-Рико — по шистосомозу, в Японии — по парагонимозу).

В нашей стране для постановки иммунологических реакций при гельминтозах выпускается целый ряд стандартных диагностикумов. Практическое применение имеют аллергическая кожная проба на эхинококкоз и альвеококкоз, РЛА с эхинококковым антигеном, РСК на холоде, реакция преципитации на холоде в различных модификациях (кольцевая преципитация, преципитация в пробирках или капиллярах, которые ставятся с трихинеллезным, цистицеркозным и мигроаскаридозным антигенами). Стандартные диагностикумы для постановки вышеназванных серологических реакций изготавливаются предприятиями по производству бактерийных препаратов. К выпускаемым диагностикумам предприятие-изготовитель прилагает подробные инструкции о правилах хранения, сроках годности препарата и наставления по применению соответствующих антигенов с техникой постановки реакции.

В последние годы перечень серологических реакций, применяемых для диагностики гельминтозов, значительно расширился. В этих целях используются следующие реакции: РИГА, непрямой иммунофлюоресценции (РИФ), иммунодиффузии в геле (РИД), встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ), РЭМА. Эти реакции могут использоваться при аскаридозе, токсокарозе, трихинеллёзе, анкилостомидозах, филяриатозах, эхинококкозе и альвеококкозе, опистор- хозе, шистосомозе, парагонимозе. Однако для этих реакции в нашей стране,не выпускаются стандартные диагностикумы и не регламентирована техника их постановки. Отдельные лаборатории, в основном научные, готовят самостоятельно специфические антигены и применяют их в различных модификациях. Описание этих методов широко представлено в литературе и не является строго унифицированным. Интерпретация данных иммунологического анализа должна основываться на изучении динамики иммунного ответа с учетом уровня специфичности и чувствительности каждой применяемой серологической реакции. Поэтому при постановке диагноза, а также при сероэпидемиологических обследованиях населения целесообразно пользоваться несколькими наиболее чувствительными реакциями. С этих позиций хорошо зарекомендовали себя реакции ВИЭФ и РЭМА, которые отличаются высокой чувствительностью и достаточно высокой специфичностью (П. Амбруаз-Тома, 1978; И. Е. Баллад, 1979; Г. М. Негряну, 1980; А. М. Пономарева, 1981; А. Я. Лысенко, 1978, и др.). Эффективность РЭМА проверена при амебиазе, лейшманиозе, трипаносомозе и токсоплазмозе (Г. А. Ермолин, 1980).