Иммуноферментный анализ (ИФА)

Иммуноферментный анализ или метод — выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции — интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, в частности для диагностики ВИЧ-инфекций, гепатита В и др., а также определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях (1010-101г г/л).

 

 

Твердофазный ИФА — вариант теста, когда один из компонентов иммунной реакции (антиген или антитело ) сорбирован на твердом носителе, напр., в лунках планшеток из полистирола. Компоненты выявляют добавлением меченых антител или антигенов. При положительном результате изменяется цвет хромогена. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путем промывания.
I.   При определении антител (рис. 7.63) в лунки планшеток с сорбированным антигеном последовательно добавляют сыворотку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом, и субстрат/хромоген для фермента.
И. При определении антигена (рис. 7.64) в лунки с сорбированными антителами вносят антиген (напр., сыворотку крови с искомым антигеном), добавляют диагностическую сыворотку против него и вторичные антитела (против диагностической сыворотки), меченные ферментом, а затем субстрат/хромоген для фермента.
Конкурентный ИФА для определения антигенов (рис. 7.65).
Конкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченные ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.

 

 

 

 

Определи ше антител в сыворотке крови больного (в лунках планшегок с сорбированным антигеном)
Рис 7.63. Определи ше антител в сыворотке крови больного (в лунках планшегок с сорбированным антигеном)

 

 

 

Определение антигена в сыворотке крови больного (в лунках планшеток с сорбированными диагностическим и антигелами)
Рис. 7.64. Определение антигена в сыворотке крови больного (в лунках планшеток с сорбированными диагностическим и антигелами)

 

 

 

 

Искомый антиген (1) и меченый ферментом антиген (2) конкурируют друг с другом за антитела (3), сорбированные на твердой фазе
Рис. 7.65. Искомый антиген (1) и меченый ферментом антиген (2) конкурируют друг с другом за антитела (3), сорбированные на твердой фазе

Все права защищены. Копирование материалов возможно только с разрешения администрации сайта.